菌落计数之ATP荧光法快速检测,系列三
ATP是Adenosine Triphosphate三磷酸腺苷的英文缩写,是参与能量代谢的重要物质,作为细胞内能量传递的“能量货币”,储存和传递化学能。当体内吸收、分泌、肌肉收缩及进行生化合成反应等需要能量时,ATP即转换成ADP,同时释放出能量。同样,在提供能量的条件下,ADP也很容易转化为ATP。在ATP与ADP的转化过程中都需要酶的参与,活细胞内这个过程是永无休止地循环进行的。伴随着ATP的水解与合成的过程,发生着能量的释放与储存,从而推动新陈代谢顺利进行。
ATP是各种生命活动能量的直接来源,存在于所有活的动植物细胞、细菌和食物残渣中。ATP 荧光检测法是根据萤火虫发光原理开发的快速检测技术。即有氧条件下,虫荧光素酶催化虫荧光素和 ATP 之间发生氧化反应形成氧化荧光素并发出荧光,其强度与微生物数量呈比例关系。
ATP最近兴起的一种检测方式,步骤如下:
. 需要采集菌液的前处理过程无法省去的(取样-重量稀释器稀释-均质器均质-取液-再稀释);
. 菌液需要进一步破膜剂破坏细胞膜,有利于染色剂对细菌的染色标记;
. 使用染色剂染色;
. 利用荧光光度计等进行测量荧光值;
. 计算出菌落的浓度值。
整个过程不过20分钟左右,应该是目前较快得测量方法了。而且已经验证与国标方法的一致性(GB/T 4789.2-2008《食品微生物学检验:细菌总数测定》)